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Contexte : Les cellules souches spermatogoniales (SSC) chez les poissons adultes sont des cellules précieuses pour la conservation et la régénération des ressources génétiques d’intérêt. En effet, les SSC transplantées dans des alevins receveurs conduisent à la formation de gamètes fonctionnels, soit des spermatozoïdes soit des ovocytes selon le sexe du poisson receveur. La cryoconservation et la transplantation des SSC permet de compenser l'incapacité de cryoconserver les ovocytes ou embryons de poisson. L'amplification des SSC en culture aiderait à augmenter la quantité de matériel disponible pour la cryoconservation des ressources génétiques. Cependant, il existe encore un énorme manque de connaissances chez le poisson sur les mécanismes moléculaires impliqués dans les propriétés prolifératives et le maintien du caractère souche des SSC adultes. Il a été démontré que les acteurs épigénétiques maintiennent l'état souche de la cellule germinale chez les mammifères. Les procédures de cryoconservation peuvent modifier la conformité épigénétique des cellules cryoconservées. Il est nécessaire d'évaluer le risque d'altérations épigénétiques qui pourraient se produire dans les SSC cryoconservées.

Objectifs : L'objectif du projet MethylStemGerm est de caractériser le modèle de méthylation de l'ADN de la SSC qui favorise le maintien de leurs propriétés de la tige. Les profils de méthylation de l'ADN seront déterminés dans les SSC et dans la spermatogonie B différenciée en utilisant RRBS (représentation réduite du séquençage des bisulfites). Contrairement au SSC, la spermatogonie différenciée s'attaque à la différenciation des cellules germinales et ne colonise pas les gonades du receveur. La localisation et l'identification des sites CpG différentiellement méthylés entre les SSC et la spermatogonie différenciée fourniront des informations sur les régions génomiques ou les gènes potentiels impliqués dans l'état de la tige du SSC. En outre, la stabilité du diagramme de méthylation de l'ADN des SSC après la cryoconservation sera évaluée, afin d'estimer l'altération potentielle de l'état de la tige SSC ou une altération potentielle de l'épigénéité des gamètes dérivés.

Attendus : Le projet aidera à caractériser le modèle de méthylation de l'ADN requis pour la maintenance de l'état de la tige des SSC amplifiés cryopréservés ou in vitro. Cela permettra de mieux maîtriser ce type de cellule pour la cryoconservation et la préservation des ressources génétiques dans les poissons.